优化重组蛋白表达，打造精确的His标签蛋白大小

引言 His标签融合蛋白在生物技术研究中广泛应用，但生产过程中往往面临着大小不一的副产物。本文探讨了影响His标签蛋白大小的关键因素，并提出优化策略，确保精确的蛋白表达。

优化重组蛋白表达，打造精确的His标签蛋白大小

影响His标签蛋白大小的因素

翻译后修饰（PTM）：糖基化、泛素化等PTM会增加蛋白分子量。 剪接变异：不同剪接异构体会产生不同大小的蛋白质。 蛋白酶降解：表达宿主中的蛋白酶会降解目标蛋白。 错误折叠：不恰当的折叠会导致蛋白聚集，增加分子量。 标签长度：His标签长度会直接影响融合蛋白的大小。

优化策略

选择合适的表达宿主：大肠杆菌和酵母菌等宿主具有不同的翻译后修饰模式，选择合适的宿主可以减少PTM的影响。 调控转录和翻译：通过改变诱导温度、培养时间或使用可诱导表达系统，可以控制蛋白表达水平，减少副产物的形成。 使用蛋白酶抑制剂：加入丝氨酸蛋白酶抑制剂或金属蛋白酶抑制剂可以防止蛋白酶降解。 优化折叠条件：通过调整pH、温度或添加折叠辅助剂，可以改善蛋白折叠，减少聚集和错误折叠。 选择合适的His标签长度：通常，6×His标签足够用于亲和纯化，过长的标签会增加分子量并干扰蛋白活性。

验证蛋白大小

SDS-PAGE：SDS-PAGE是确认蛋白大小的标准方法，通过分子量的差别来区分不同蛋白。 MALDI-TOF质谱：MALDI-TOF质谱可以精确测量蛋白分子量，并鉴定不同异构体。 Western印迹：Western印迹使用抗His标签抗体检测融合蛋白，可以验证蛋白的存在和大小。

结论